所需設備和容器

超凈臺

生物安全柜

細胞培養(yǎng)箱

顯微鏡

各種size的細胞瓶、細胞皿，還有細胞培養(yǎng)板。請注意（細胞皿底部是要經過處理的喲，不然細胞無法貼壁。

相關知識

何為細胞培養(yǎng)？

細胞常規(guī)培養(yǎng)是在細胞房中進行，在超凈工作臺或生物安全柜中，把細胞處理好，根據需要加入細胞培養(yǎng)基，放入細胞培養(yǎng)瓶/皿或細胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5% CO2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞就像花花草草，尤其是細胞株基本每天都要觀察、打理的哦！

培養(yǎng)的細胞從哪里來？

1.細胞株

簡單說就是買的或送的。

2.原代細胞

組織或血液中提取的。一般細胞株可以連續(xù)傳代，而原代細胞養(yǎng)著養(yǎng)著就掛了。

培養(yǎng)細胞的生長方式有哪些？

1.貼壁生長

必須貼附于支持物表面才能生長。見于各種腫瘤細胞等。（你把培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶底朝上，細胞也不會掉下來。

2.懸浮生長

于懸浮狀態(tài)下即可生長，不需要貼附于支持物表面。見于各種造血系統(tǒng)腫瘤細胞等。

PS：

每代貼附生長細胞的生長過程分為：

1）游離期：細胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)，也稱懸浮期 。

2）貼壁期：細胞貼附于（膠原、玻璃、塑料、其他細胞等）。

3）潛伏期：細胞有省長活動而無細胞分裂。

4）對數生長期：細胞數隨時間變化成倍增長，活力十足，MAX適合進行實驗研究。

培養(yǎng)細胞需要怎樣的生長條件？

1.細胞的營養(yǎng)需要

2.細胞的生存環(huán)境

溫度：37℃

O2：95%

CO2：5%

PH：7.2-7.4

一定的滲透壓

3. 無污染

4.無毒

細胞*培養(yǎng)基的組成有哪些？

基礎培養(yǎng)基：80-95%

血清：5-20%

碳酸氫鈉：2.0g/L

青、鏈霉素：各200單位/毫升

細胞傳代

Q1：何為細胞傳代？

細胞在培養(yǎng)器皿中生長一定時間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿即為細胞傳代。

Q2:為什么要傳代？

簡單說就是“孩子”長大了，要“分家”！

細胞株在培養(yǎng)過程中數量會不斷增多，但是培養(yǎng)細胞的細胞瓶/皿的空間有限，就會導致細胞之間接觸過于緊密，會使得細胞增殖收到抑制，所以我們必須把其中一部分細胞轉移到別的細胞瓶/皿，讓細胞有足夠的生長空間。

Q3:什么時候傳代？

觀察培養(yǎng)基是否正常，細胞狀態(tài)如何，細胞密度如何，決定是否傳代。如培養(yǎng)基變黃，細胞長成致密單層等情況。

Q4：傳代方法有哪些？

1.懸浮生長細胞傳代

1)離心法傳代：離心1000轉/分去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。

2)直接傳代法：懸浮細胞沉淀在瓶壁上，將上清培養(yǎng)液去除1/2~2/3，然后用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代。

2.半懸浮生長細胞傳代

此類細胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象，但是貼壁不牢，可用直接吹打使細胞從瓶壁上脫落下來，進行傳代。

3.貼壁生長細胞傳代

采用胰酶消化法傳代。常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。

靠技術“馴化”細胞

1） 嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干。
2） 不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套。
3） 有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測。
4） 水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話，盤里的水也會很臟，勤換 (滅菌水加進去)。
5） 晚上離開的時候建議給細胞房照紫外，超凈臺是用完就開紫外（記得照30min后關掉）。
6） 同一時間就你一個人在用細胞房在養(yǎng)細胞。

靠內心"感動"細胞

1） 自己的細胞自己養(yǎng)，血的教訓。
2） 在生物安全柜 (或者超凈臺)，槍頭，血清管，血清，培養(yǎng)基，瓶子，培養(yǎng)箱都足夠好，并且細胞房有良好的衛(wèi)生措施 (比如隔離服，手套，口罩，清潔，HEPA 等等) 且不違反操作原則的情況下，你其實很難污染。
3） 上述條件不完備的情況下，就要多注意無菌操作了：比如要用的東西提前拿到臺子里照啊 (不過這個其實也不大好，因為會擋住紫外線)，使用前 SDS+酒精擦臺子，進出超凈臺一定要酒精擦手。
4） 少對細胞說話，多靠內心來感動它們 (是的! 心不誠是不可以的!)

養(yǎng)細胞就像打仗，知彼知己，百戰(zhàn)不殆！只有了解你養(yǎng)的對象，才能把它養(yǎng)好！